Farmakope Tiongkok (edisi 2020) mensyaratkan bahwa ekstrak metanol YCH tidak boleh kurang dari 20,0% [2], tanpa ada indikator evaluasi kualitas lain yang ditentukan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan ekstrak metanol sampel liar dan budidaya sama-sama memenuhi standar farmakope, dan tidak terdapat perbedaan nyata diantara keduanya. Oleh karena itu, tidak ada perbedaan kualitas yang jelas antara sampel liar dan budidaya, menurut indeks tersebut. Namun, kandungan total sterol dan total flavonoid pada sampel liar jauh lebih tinggi dibandingkan sampel budidaya. Analisis metabolomik lebih lanjut mengungkapkan keragaman metabolit yang melimpah antara sampel liar dan budidaya. Selain itu, 97 metabolit yang berbeda secara signifikan disaring, yang tercantum dalamTabel Tambahan S2. Di antara metabolit yang berbeda secara signifikan ini adalah β-sitosterol (ID adalah M397T42) dan turunan quercetin (M447T204_2), yang telah dilaporkan sebagai bahan aktif. Konstituen yang sebelumnya tidak dilaporkan, seperti trigonelline (M138T291_2), betaine (M118T277_2), fustin (M269T36), rotenone (M241T189), arctiin (M557T165) dan asam loganat (M399T284_2), juga termasuk di antara metabolit diferensial. Komponen-komponen ini memainkan berbagai peran dalam anti-oksidasi, anti-inflamasi, menangkal radikal bebas, anti-kanker dan mengobati aterosklerosis dan, oleh karena itu, mungkin merupakan komponen aktif baru yang diduga dalam YCH. Kandungan bahan aktif menentukan khasiat dan mutu bahan obat [7]. Singkatnya, ekstrak metanol sebagai satu-satunya indeks evaluasi kualitas YCH memiliki beberapa keterbatasan, dan penanda kualitas yang lebih spesifik perlu dieksplorasi lebih lanjut. Terdapat perbedaan yang signifikan dalam total sterol, total flavonoid dan kandungan banyak metabolit diferensial lainnya antara YCH liar dan budidaya; jadi, kemungkinan ada beberapa perbedaan kualitas di antara keduanya. Pada saat yang sama, bahan aktif potensial yang baru ditemukan di YCH mungkin memiliki nilai referensi penting untuk studi dasar fungsional YCH dan pengembangan lebih lanjut sumber daya YCH.
Pentingnya bahan obat asli telah lama diketahui di daerah asalnya untuk memproduksi obat herbal Tiongkok dengan kualitas terbaik [
8]. Kualitas tinggi merupakan atribut penting dari bahan obat asli, dan habitat merupakan faktor penting yang mempengaruhi kualitas bahan tersebut. Sejak YCH mulai dimanfaatkan sebagai obat, sudah lama didominasi oleh YCH liar. Menyusul keberhasilan pengenalan dan domestikasi YCH di Ningxia pada tahun 1980an, sumber bahan obat Yinchaihu secara bertahap beralih dari YCH liar ke YCH budidaya. Menurut penyelidikan sebelumnya terhadap sumber YCH [
9] dan penyelidikan lapangan kelompok penelitian kami, terdapat perbedaan yang signifikan dalam wilayah distribusi bahan obat budidaya dan liar. YCH liar sebagian besar tersebar di Daerah Otonomi Ningxia Hui di Provinsi Shaanxi, berdekatan dengan zona kering Mongolia Dalam dan Ningxia tengah. Secara khusus, gurun stepa di wilayah ini merupakan habitat yang paling cocok untuk pertumbuhan YCH. Sebaliknya, YCH yang dibudidayakan terutama tersebar di sebelah selatan wilayah sebaran liar, seperti Kabupaten Tongxin (Budidaya I) dan sekitarnya, yang telah menjadi basis budidaya dan produksi terbesar di Tiongkok, dan Kabupaten Pengyang (Budidaya II) , yang terletak di wilayah lebih selatan dan merupakan daerah penghasil YCH yang dibudidayakan. Apalagi habitat kedua kawasan budidaya di atas bukanlah padang rumput gurun. Oleh karena itu, selain cara produksinya, terdapat juga perbedaan yang signifikan pada habitat YCH liar dan budidaya. Habitat merupakan faktor penting yang mempengaruhi mutu bahan obat herbal. Habitat yang berbeda akan mempengaruhi pembentukan dan akumulasi metabolit sekunder pada tanaman, sehingga mempengaruhi mutu produk obat.
10,
11]. Oleh karena itu, perbedaan yang signifikan dalam kandungan total flavonoid dan total sterol serta ekspresi 53 metabolit yang kami temukan dalam penelitian ini mungkin disebabkan oleh pengelolaan lapangan dan perbedaan habitat.
Salah satu cara utama pengaruh lingkungan terhadap kualitas bahan obat adalah dengan memberikan tekanan pada tanaman sumbernya. Stres lingkungan yang moderat cenderung merangsang akumulasi metabolit sekunder [
12,
13]. Hipotesis keseimbangan pertumbuhan/diferensiasi menyatakan bahwa ketika pasokan nutrisi cukup, tanaman akan tumbuh, sedangkan ketika nutrisi kekurangan, tanaman akan berdiferensiasi dan menghasilkan lebih banyak metabolit sekunder.
14]. Cekaman kekeringan akibat kekurangan air merupakan tekanan lingkungan utama yang dihadapi tanaman di daerah kering. Dalam studi ini, kondisi air pada YCH yang dibudidayakan lebih berlimpah, dengan tingkat curah hujan tahunan yang jauh lebih tinggi dibandingkan YCH liar (persediaan air untuk Budidaya I sekitar 2 kali lipat dari YCH Liar; Persediaan air untuk YCH Budidaya II sekitar 3,5 kali lipat dari YCH Liar. ). Selain itu, tanah di alam bebas merupakan tanah berpasir, sedangkan tanah di lahan pertanian merupakan tanah liat. Dibandingkan dengan tanah liat, tanah berpasir memiliki kapasitas retensi air yang buruk dan lebih cenderung memperburuk stres kekeringan. Sementara itu, proses budidaya sering kali disertai dengan penyiraman sehingga tingkat cekaman kekeringan rendah. YCH liar tumbuh di habitat alami yang gersang dan oleh karena itu ia mungkin mengalami tekanan kekeringan yang lebih serius.
Osmoregulasi adalah mekanisme fisiologis penting yang digunakan tanaman untuk mengatasi cekaman kekeringan, dan alkaloid merupakan pengatur osmotik penting pada tanaman tingkat tinggi.
15]. Betaine adalah senyawa amonium kuaterner alkaloid yang larut dalam air dan dapat bertindak sebagai osmoprotektan. Cekaman kekeringan dapat mengurangi potensi osmotik sel, sementara osmoprotektan menjaga dan memelihara struktur dan integritas makromolekul biologis, dan secara efektif mengurangi kerusakan akibat cekaman kekeringan pada tanaman [
16]. Misalnya, pada kondisi kekeringan, kandungan betaine pada bit gula dan Lycium barbarum meningkat secara signifikan [
17,
18]. Trigonelin adalah pengatur pertumbuhan sel, dan di bawah tekanan kekeringan, trigonellin dapat memperpanjang siklus sel tanaman, menghambat pertumbuhan sel dan menyebabkan penyusutan volume sel. Peningkatan relatif konsentrasi zat terlarut dalam sel memungkinkan tanaman mencapai regulasi osmotik dan meningkatkan kemampuannya untuk melawan cekaman kekeringan.
19]. JIA X [
20] menemukan bahwa, dengan peningkatan cekaman kekeringan, Astragalus membranaceus (sumber pengobatan tradisional Tiongkok) menghasilkan lebih banyak trigonelin, yang berfungsi mengatur potensi osmotik dan meningkatkan kemampuan melawan cekaman kekeringan. Flavonoid juga telah terbukti memainkan peran penting dalam ketahanan tanaman terhadap cekaman kekeringan.
21,
22]. Sejumlah besar penelitian telah mengkonfirmasi bahwa stres kekeringan sedang kondusif terhadap akumulasi flavonoid. Lang Duo-Yong dkk. [
23] membandingkan dampak cekaman kekeringan pada YCH dengan mengendalikan kapasitas menahan air di lapangan. Ditemukan bahwa cekaman kekeringan menghambat pertumbuhan akar sampai batas tertentu, namun pada cekaman kekeringan sedang dan berat (40% kapasitas menahan air sawah), kandungan total flavonoid dalam YCH meningkat. Sementara itu, pada kondisi cekaman kekeringan, fitosterol dapat berperan mengatur fluiditas dan permeabilitas membran sel, menghambat kehilangan air, dan meningkatkan ketahanan terhadap stres.
24,
25]. Oleh karena itu, peningkatan akumulasi total flavonoid, total sterol, betaine, trigonelline dan metabolit sekunder lainnya pada YCH liar mungkin terkait dengan cekaman kekeringan intensitas tinggi.
Dalam studi ini, analisis pengayaan jalur KEGG dilakukan terhadap metabolit yang ditemukan berbeda secara signifikan antara YCH liar dan budidaya. Metabolit yang diperkaya termasuk yang terlibat dalam jalur metabolisme askorbat dan aldarat, biosintesis aminoasil-tRNA, metabolisme histidin, dan metabolisme beta-alanin. Jalur metabolisme ini berkaitan erat dengan mekanisme ketahanan tanaman terhadap stres. Diantaranya, metabolisme askorbat memainkan peran penting dalam produksi antioksidan tanaman, metabolisme karbon dan nitrogen, ketahanan terhadap stres dan fungsi fisiologis lainnya [
26]; Biosintesis aminoasil-tRNA merupakan jalur penting untuk pembentukan protein.
27,
28], yang terlibat dalam sintesis protein tahan stres. Jalur histidin dan β-alanin dapat meningkatkan toleransi tanaman terhadap tekanan lingkungan.
29,
30]. Hal ini lebih lanjut menunjukkan bahwa perbedaan metabolit antara YCH liar dan budidaya berkaitan erat dengan proses ketahanan terhadap stres.
Tanah merupakan bahan dasar pertumbuhan dan perkembangan tanaman obat. Nitrogen (N), fosfor (P) dan kalium (K) dalam tanah merupakan unsur hara yang penting bagi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Bahan organik tanah juga mengandung N, P, K, Zn, Ca, Mg serta unsur makro dan unsur jejak lainnya yang diperlukan untuk tanaman obat. Nutrisi yang berlebihan atau kekurangan, atau rasio nutrisi yang tidak seimbang, akan mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan serta kualitas bahan obat, dan tanaman yang berbeda memiliki kebutuhan nutrisi yang berbeda [
31,
32,
33]. Misalnya, stres N yang rendah mendorong sintesis alkaloid di Isatis indigotica, dan bermanfaat bagi akumulasi flavonoid pada tanaman seperti Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge dan Dichondra repens Forst. Sebaliknya, terlalu banyak N menghambat akumulasi flavonoid pada spesies seperti Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis dan Ginkgo biloba, dan mempengaruhi kualitas bahan obat [
34]. Penerapan pupuk P efektif meningkatkan kandungan asam glisirrhizic dan dihydroacetone pada licorice Ural [
35]. Ketika jumlah aplikasi melebihi 0.12 kg·m−2, kandungan total flavonoid dalam Tussilago farfara menurun [
36]. Pemberian pupuk P berpengaruh negatif terhadap kandungan polisakarida pada obat tradisional Cina rhizoma polygonati [
37], namun pupuk K efektif meningkatkan kandungan saponinnya [
38]. Pemberian pupuk K sebanyak 450 kg·hm−2 adalah yang terbaik untuk pertumbuhan dan akumulasi saponin notoginseng Panax berumur dua tahun [
39]. Dengan rasio N:P:K = 2:2:1, jumlah total ekstrak hidrotermal, harpagide dan harpagoside adalah yang tertinggi [
40]. Tingginya rasio N, P dan K bermanfaat mendorong pertumbuhan Pogostemon cablin dan meningkatkan kandungan minyak atsiri. Rasio N, P dan K yang rendah meningkatkan kandungan komponen efektif utama minyak daun batang Pogostemon cablin [
41]. YCH adalah tanaman yang toleran terhadap tanah tandus, dan mungkin mempunyai kebutuhan khusus akan unsur hara seperti N, P dan K. Dalam penelitian ini, dibandingkan dengan YCH yang dibudidayakan, tanah pada tanaman YCH liar relatif tandus: kandungan tanah bahan organik, N total, P total, dan K total masing-masing sekitar 1/10, 1/2, 1/3 dan 1/3 dari tanaman budidaya. Oleh karena itu, perbedaan unsur hara tanah mungkin menjadi alasan lain atas perbedaan antara metabolit yang terdeteksi pada YCH budidaya dan YCH liar. Weibao Ma dkk. [
42] menemukan bahwa pemberian pupuk N dan pupuk P dalam jumlah tertentu meningkatkan hasil dan kualitas benih secara signifikan. Namun pengaruh unsur hara terhadap kualitas YCH belum jelas, dan upaya pemupukan untuk meningkatkan kualitas bahan obat memerlukan penelitian lebih lanjut.
Obat-obatan herbal Tiongkok memiliki ciri-ciri “Habitat yang menguntungkan meningkatkan hasil, dan habitat yang tidak menguntungkan meningkatkan kualitas” [
43]. Dalam proses peralihan bertahap dari YCH liar ke YCH budidaya, habitat tanaman berubah dari padang gurun yang gersang dan tandus menjadi lahan pertanian subur dengan air yang lebih melimpah. Habitat YCH yang dibudidayakan lebih unggul dan hasil panen lebih tinggi sehingga membantu memenuhi permintaan pasar. Namun, habitat unggul ini menyebabkan perubahan signifikan pada metabolit YCH; Apakah hal ini kondusif untuk meningkatkan kualitas YCH dan bagaimana mencapai produksi YCH berkualitas tinggi melalui langkah-langkah budidaya berbasis sains memerlukan penelitian lebih lanjut.
Budidaya habitat simulatif adalah metode simulasi habitat dan kondisi lingkungan tanaman obat liar, berdasarkan pengetahuan tentang adaptasi jangka panjang tanaman terhadap tekanan lingkungan tertentu [
43]. Dengan mensimulasikan berbagai faktor lingkungan yang mempengaruhi tumbuhan liar, khususnya habitat asli tumbuhan yang digunakan sebagai sumber bahan obat asli, pendekatan ini menggunakan desain ilmiah dan intervensi manusia yang inovatif untuk menyeimbangkan pertumbuhan dan metabolisme sekunder tanaman obat Tiongkok [
43]. Metode tersebut bertujuan untuk mencapai pengaturan yang optimal bagi pengembangan bahan obat yang berkualitas tinggi. Budidaya habitat simulasi harus menyediakan cara yang efektif untuk produksi YCH berkualitas tinggi bahkan ketika dasar farmakodinamik, penanda kualitas dan mekanisme respon terhadap faktor lingkungan tidak jelas. Oleh karena itu, kami menyarankan agar rancangan ilmiah dan upaya pengelolaan lapangan dalam budidaya dan produksi YCH dilakukan dengan mengacu pada karakteristik lingkungan YCH liar, seperti kondisi tanah yang gersang, tandus, dan berpasir. Sekaligus juga diharapkan para peneliti untuk melakukan penelitian lebih mendalam mengenai dasar material fungsional dan penanda kualitas YCH. Studi-studi ini dapat memberikan kriteria evaluasi yang lebih efektif untuk YCH, dan mendorong produksi berkualitas tinggi dan pembangunan industri yang berkelanjutan.