Osteoartritis (OA) adalah salah satu penyakit sendi tulang degeneratif kronis jangka panjang yang menyerang populasi lanjut usia di atas 65 tahun.
1Secara umum, pasien OA didiagnosis dengan kerusakan tulang rawan, peradangan sinovium, dan erosi kondrosit, yang memicu rasa sakit dan ketidaknyamanan fisik.
2Nyeri artritis sebagian besar disebabkan oleh degenerasi tulang rawan di persendian akibat peradangan, dan ketika tulang rawan rusak parah, tulang dapat saling bertabrakan sehingga menyebabkan rasa sakit yang tak tertahankan dan kesulitan fisik.
3Keterlibatan mediator inflamasi dengan gejala seperti nyeri, pembengkakan, dan kekakuan sendi telah terdokumentasi dengan baik. Pada pasien OA, sitokin inflamasi, yang menyebabkan erosi tulang rawan dan tulang subkondral, ditemukan dalam cairan sinovial [
4Dua keluhan utama yang umumnya dialami pasien OA adalah nyeri dan peradangan sinovial. Oleh karena itu, tujuan utama terapi OA saat ini adalah untuk mengurangi nyeri dan peradangan.
5Meskipun pengobatan OA yang tersedia, termasuk obat non-steroid dan steroid, telah terbukti efektif dalam mengurangi nyeri dan peradangan, penggunaan jangka panjang obat-obatan ini memiliki konsekuensi kesehatan yang serius seperti disfungsi kardiovaskular, gastrointestinal, dan ginjal.
6Oleh karena itu, obat yang lebih efektif dengan efek samping yang lebih sedikit perlu dikembangkan untuk pengobatan osteoartritis.
Produk kesehatan alami semakin populer karena aman dan mudah didapatkan.
7Obat-obatan tradisional Korea telah terbukti memiliki khasiat melawan beberapa penyakit inflamasi, termasuk radang sendi.
8Aucklandia lappa DC. dikenal karena khasiat obatnya, seperti meningkatkan sirkulasi qi untuk meredakan nyeri dan menenangkan perut, dan telah digunakan secara tradisional sebagai analgesik alami.
9]. Laporan sebelumnya menunjukkan bahwa A. lappa memiliki sifat anti-inflamasi [
10,
11], analgesik [
12], antikanker [
13], dan gastroprotektif [
14] efek. Berbagai aktivitas biologis A. lappa disebabkan oleh senyawa aktif utamanya: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone dan costuslactone [
15]. Studi sebelumnya mengklaim bahwa costunolide menunjukkan sifat anti-inflamasi pada lipopolysaccharide (LPS), yang menginduksi makrofag melalui regulasi jalur NF-kB dan protein kejut panas [
16,
17Namun, belum ada penelitian yang menyelidiki potensi aktivitas A. lappa untuk pengobatan OA. Penelitian ini menyelidiki efek terapeutik A. lappa terhadap OA menggunakan model hewan pengerat yang diinduksi MIA (monosodium-iodoasetat) dan asam asetat.
Monosodium-iodoasetat (MIA) terkenal digunakan untuk menghasilkan sebagian besar perilaku nyeri dan fitur patofisiologis OA pada hewan [
18,
19,
20Ketika disuntikkan ke sendi lutut, MIA mengganggu metabolisme kondrosit dan menginduksi peradangan serta gejala peradangan, seperti erosi tulang rawan dan tulang subkondral, yang merupakan gejala utama OA.
18Respons menggeliat yang ditimbulkan dengan asam asetat secara luas dianggap sebagai simulasi nyeri perifer pada hewan di mana nyeri inflamasi dapat diukur secara kuantitatif.
19]. Garis sel makrofag tikus, RAW264.7, populer digunakan untuk mempelajari respons seluler terhadap peradangan. Setelah diaktivasi dengan LPS, makrofag RAW264 mengaktifkan jalur inflamasi dan mengeluarkan beberapa perantara inflamasi, seperti TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, dan IL-6 [
20Studi ini mengevaluasi efek antinosiseptif dan antiinflamasi A. lappa terhadap OA pada model hewan MIA, model hewan yang diinduksi asam asetat, dan sel RAW264.7 yang diaktifkan LPS.
2. Bahan dan Metode
2.1. Bahan Tanaman
Akar kering A. lappa DC. yang digunakan dalam percobaan diperoleh dari Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Akar tersebut diidentifikasi oleh Prof. Donghun Lee, Departemen Farmakologi Herbal, Fakultas Kedokteran Korea, Universitas Gachon, dan nomor spesimen vouchernya terdaftar sebagai 18060301.
2.2. Analisis HPLC Ekstrak A. lappa
A. lappa diekstraksi menggunakan alat refluks (air suling, 3 jam pada 100 °C). Larutan hasil ekstraksi disaring dan dipekatkan menggunakan evaporator bertekanan rendah. Ekstrak A. lappa memiliki hasil 44,69% setelah pengeringan beku pada suhu −80 °C. Analisis kromatografi A. lappa dilakukan dengan HPLC yang terhubung menggunakan sistem HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Untuk pemisahan kromatik, kolom EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) digunakan pada suhu 35 °C. Sebanyak 100 mg spesimen diencerkan dalam 10 mL metanol 50% dan disonikasi selama 10 menit. Sampel disaring menggunakan filter jarum suntik (Waters Corp., Milford, MA, USA) berukuran 0,45 μm. Komposisi fase gerak adalah 0,1% asam fosfat (A) dan asetonitril (B), dan kolom dielusi sebagai berikut: 0–60 menit, 0%; 60–65 menit, 100%; 65–67 menit, 100%; 67–72 menit, 0% pelarut B dengan laju alir 1,0 mL/menit. Eluen diamati pada 210 nm menggunakan volume injeksi 10 μL. Analisis dilakukan sebanyak tiga kali.
2.3. Kandang dan Pengelolaan Hewan
Tikus Sprague–Dawley (SD) jantan berusia 5 minggu dan tikus ICR jantan berusia 6 minggu dibeli dari Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Hewan-hewan tersebut dipelihara di ruangan dengan suhu konstan (22 ± 2 °C) dan kelembapan (55 ± 10%) serta siklus terang/gelap 12/12 jam. Hewan-hewan tersebut dibiasakan dengan kondisi tersebut selama lebih dari seminggu sebelum percobaan dimulai. Hewan-hewan tersebut diberi pakan dan air secara ad libitum. Aturan etika terkini untuk perawatan dan penanganan hewan di Universitas Gachon (GIACUC-R2019003) diikuti secara ketat dalam semua prosedur eksperimen hewan. Studi ini dirancang sebagai uji coba buta peneliti dan paralel. Kami mengikuti metode eutanasia sesuai dengan pedoman Komite Etika Eksperimen Hewan.
2.4. Injeksi dan Perawatan MIA
Tikus secara acak dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu sham, kontrol, indometasin, dan A. lappa. Setelah dibius dengan campuran isofluorane O2 2%, tikus disuntikkan 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) secara intraartikular ke dalam sendi lutut untuk menyebabkan OA eksperimental. Perlakuan dilakukan sebagai berikut: kelompok kontrol dan sham hanya diberi diet dasar AIN-93G. Hanya kelompok indometasin yang diberi indometasin (3 mg/kg) yang dicampurkan ke dalam diet AIN-93G dan kelompok A. lappa 300 mg/kg diberi diet AIN-93G yang ditambah dengan A. lappa (300 mg/kg). Perlakuan dilanjutkan selama 24 hari sejak hari induksi OA dengan dosis 15–17 g per 190–210 g berat badan setiap hari.
2.5. Pengukuran Beban yang Dapat Ditanggung
Setelah induksi OA, pengukuran kapasitas menahan beban tungkai belakang tikus dilakukan dengan incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) sesuai jadwal. Distribusi berat pada tungkai belakang dihitung: kapasitas menahan beban (%)
