Osteoartritis (OA) adalah salah satu penyakit sendi tulang degeneratif kronis jangka panjang yang menyerang populasi berusia di atas 65 tahun [
1]. Umumnya, pasien OA didiagnosis dengan kerusakan tulang rawan, peradangan sinovium, dan terkikisnya kondrosit, sehingga memicu nyeri dan tekanan fisik.
2]. Nyeri rematik sebagian besar disebabkan oleh degenerasi tulang rawan pada persendian akibat peradangan, dan ketika tulang rawan rusak parah, tulang dapat saling bertabrakan sehingga menyebabkan rasa sakit yang tak tertahankan dan kesulitan fisik.
3]. Keterlibatan mediator inflamasi dengan gejala seperti nyeri, bengkak, dan kekakuan sendi telah diketahui dengan baik. Pada pasien OA, sitokin inflamasi yang menyebabkan erosi tulang rawan dan tulang subkondral ditemukan dalam cairan sinovial.
4]. Dua keluhan utama yang umumnya dialami pasien OA adalah nyeri dan peradangan sinovial. Oleh karena itu, tujuan utama terapi OA saat ini adalah untuk mengurangi rasa sakit dan peradangan. [
5]. Meskipun pengobatan OA yang tersedia, termasuk obat-obatan non-steroid dan steroid, telah terbukti efektif dalam mengurangi rasa sakit dan peradangan, penggunaan obat-obatan ini dalam jangka panjang mempunyai konsekuensi kesehatan yang parah seperti disfungsi kardiovaskular, gastrointestinal, dan ginjal.
6]. Oleh karena itu, obat yang lebih efektif dengan efek samping yang lebih sedikit harus dikembangkan untuk pengobatan osteoartritis.
Produk kesehatan alami semakin populer karena aman dan mudah didapat [
7]. Obat-obatan tradisional Korea telah terbukti berkhasiat melawan beberapa penyakit inflamasi, termasuk arthritis [
8]. Aucklandia lappa DC. dikenal karena khasiat obatnya, seperti meningkatkan sirkulasi qi untuk menghilangkan rasa sakit dan menenangkan perut, dan telah digunakan secara tradisional sebagai analgesik alami [
9]. Laporan sebelumnya menunjukkan bahwa A. lappa memiliki anti-inflamasi [
10,
11], analgesik [
12], antikanker [
13], dan gastroprotektif [
14] efek. Berbagai aktivitas biologis A. lappa disebabkan oleh senyawa aktif utamanya: costunolide, dehydrocostus lakton, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lakton dan costuslactone [
15]. Penelitian sebelumnya mengklaim bahwa costunolide menunjukkan sifat anti-inflamasi pada lipopolisakarida (LPS), yang menginduksi makrofag melalui regulasi NF-kB dan jalur protein heat shock [
16,
17]. Namun, belum ada penelitian yang menyelidiki potensi aktivitas A. lappa untuk pengobatan OA. Penelitian ini telah menyelidiki efek terapeutik A. lappa terhadap OA menggunakan MIA (monosodium-iodoacetate) dan model hewan pengerat yang diinduksi asam asetat.
Monosodium-iodoacetate (MIA) terkenal digunakan untuk menghasilkan banyak perilaku nyeri dan gambaran patofisiologi OA pada hewan [
18,
19,
20]. Ketika disuntikkan ke sendi lutut, MIA mengacaukan metabolisme kondrosit dan menyebabkan peradangan dan gejala peradangan, seperti erosi tulang rawan dan tulang subkondral, yang merupakan gejala utama OA.
18]. Respon menggeliat yang diinduksi dengan asam asetat secara luas dianggap sebagai simulasi nyeri perifer pada hewan dimana nyeri inflamasi dapat diukur secara kuantitatif.
19]. Garis sel makrofag tikus, RAW264.7, populer digunakan untuk mempelajari respons seluler terhadap peradangan. Setelah aktivasi dengan LPS, makrofag RAW264 mengaktifkan jalur inflamasi dan mengeluarkan beberapa perantara inflamasi, seperti TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, dan IL-6 [
20]. Penelitian ini telah mengevaluasi efek anti-nosiseptif dan anti-inflamasi A. lappa terhadap OA pada model hewan MIA, model hewan yang diinduksi asam asetat, dan sel RAW264.7 yang teraktivasi LPS.
2. Bahan dan Metode
2.1. Bahan Tumbuhan
Akar kering A. lappa DC. yang digunakan dalam percobaan diperoleh dari Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Itu diidentifikasi oleh Prof. Donghun Lee, Departemen Farmakologi Herbal, Kol. Pengobatan Korea, Universitas Gachon, dan nomor spesimen voucher disimpan sebagai 18060301.
2.2. Analisis HPLC Ekstrak A. lappa
A. lappa diekstraksi menggunakan alat refluks (air suling, 3 jam pada 100 °C). Larutan hasil ekstraksi disaring dan dikondensasikan menggunakan evaporator bertekanan rendah. Ekstrak A. lappa memiliki rendemen sebesar 44,69% setelah pengeringan beku pada suhu −80 °C. Analisis kromatografi A. lappa dilakukan dengan HPLC yang dihubungkan menggunakan sistem HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Untuk pemisahan kromatik, kolom EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) digunakan pada suhu 35 °C. Sebanyak 100 mg spesimen diencerkan dalam 10 mL metanol 50% dan disonikasi selama 10 menit. Sampel disaring dengan filter jarum suntik (Waters Corp, Milford, MA, USA) sebesar 0,45 μm. Komposisi fase geraknya adalah 0,1% asam fosfat (A) dan asetonitril (B) dan kolom dielusi sebagai berikut: 0–60 menit, 0%; 60–65 menit, 100%; 65–67 menit, 100%; 67–72 menit, 0% pelarut B dengan laju aliran 1,0 mL/menit. Efluen diamati pada 210 nm menggunakan volume injeksi 10 μL. Analisis dilakukan dalam rangkap tiga.
2.3. Perumahan dan Pengelolaan Hewan
Tikus Sprague-Dawley (SD) jantan berumur 5 minggu dan tikus ICR jantan berumur 6 minggu dibeli dari Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Hewan dipelihara dalam ruangan dengan suhu konstan (22 ± 2 °C) dan kelembaban (55 ± 10%) dan siklus terang/gelap 12/12 jam. Hewan-hewan tersebut dibiasakan dengan kondisi tersebut selama lebih dari seminggu sebelum percobaan dimulai. Hewan mempunyai persediaan pakan dan air ad libitum. Aturan etika saat ini untuk perawatan dan penanganan hewan di Universitas Gachon (GIACUC-R2019003) dipatuhi secara ketat dalam semua prosedur percobaan hewan. Penelitian ini dirancang sebagai investigasi blinded trial dan parallel trial. Kami mengikuti metode euthanasia sesuai dengan pedoman Komite Etika Eksperimental Hewan.
2.4. Injeksi dan Perawatan MIA
Tikus dipisahkan secara acak menjadi 4 kelompok yaitu kelompok sham, kontrol, indometasin, dan A. lappa. Dibius dengan campuran isofluorane O2 2%, tikus disuntik menggunakan 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) secara intra-artikular ke dalam sendi lutut untuk menghasilkan OA eksperimental. Perlakuan dilakukan sebagai berikut: kelompok kontrol dan kelompok palsu dipertahankan hanya dengan diet dasar AIN-93G. Hanya saja, kelompok indometasin diberikan indometasin (3 mg/kg) yang dimasukkan ke dalam diet AIN-93G dan kelompok A. lappa 300 mg/kg diberikan diet AIN-93G yang dilengkapi dengan A. lappa (300 mg/kg). Perawatan dilanjutkan selama 24 hari sejak hari induksi OA dengan dosis 15–17 g per 190–210 g berat badan setiap hari.
2.5. Pengukuran Bantalan Berat
Setelah induksi OA, pengukuran kapasitas menahan beban pada tungkai belakang tikus dilakukan dengan incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) sesuai jadwal. Distribusi beban pada tungkai belakang dihitung: kapasitas menahan beban (%)
